單病毒標(biāo)記與示蹤
單病毒標(biāo)記與示蹤是一種利用熒光探針或其他標(biāo)記物對(duì)單個(gè)或多個(gè)病毒粒子進(jìn)行可視化和追蹤的技術(shù),可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)病毒與宿主細(xì)胞的相互作用過(guò)程,揭示病毒侵染的動(dòng)態(tài)機(jī)制。
單病毒標(biāo)記與示蹤技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于多種動(dòng)物病毒的研究,如流感病毒、呼吸道合胞體病毒、禽流感病毒、非洲豬瘟病毒、人類(lèi)免疫缺陷病毒等。
利用單病毒標(biāo)記與示蹤技術(shù)成功解析了豬冠狀病毒(Porcine coronavirus, PDCoV)早期入胞及胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的動(dòng)態(tài)過(guò)程。首先利用生物素-親和素系統(tǒng)對(duì)PDCoV進(jìn)行熒光標(biāo)記,然后利用高速熒光顯微鏡對(duì)活細(xì)胞中的單個(gè)PDCoV顆粒進(jìn)行實(shí)時(shí)跟蹤,發(fā)現(xiàn)PDCoV主要通過(guò)囊泡介導(dǎo)的內(nèi)吞方式進(jìn)入細(xì)胞,并在內(nèi)體囊泡中停留約10分鐘后釋放到細(xì)胞質(zhì)中。PDCoV在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)主要依賴(lài)微管骨架,并受到微管驅(qū)動(dòng)蛋白dynein和kinesin的調(diào)控。該研究為深入理解PDCoV的侵染機(jī)制和尋找抗病毒藥物提供了重要線索。
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