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生物膜微環(huán)境激活的雙功能納米酶用于精準(zhǔn)靶向細(xì)菌病原體


發(fā)布時(shí)間:2021-07-24 13:24:42     人氣:1216

背景介紹


齲齒是一種由生物膜引發(fā)的疾病,膳食糖分和微生物的相互作用引起礦化牙齒的酸溶解,若不及時(shí)治療,會(huì)導(dǎo)致全身性并發(fā)癥。這類飲食在破壞牙齒表面共生細(xì)菌與條件致病菌之間的相互作用中起著關(guān)鍵作用,過量糖分的攝入,會(huì)導(dǎo)致牙齒表面細(xì)菌胞外聚合物(extracellular polymeric substances, EPS)大量產(chǎn)生,同時(shí)還會(huì)酸化與齲齒相關(guān)的生物膜微環(huán)境。致病菌,如變異鏈球菌,因其能夠生成大量EPS,代謝碳水化合物成為有機(jī)酸,并在酸性條件下生存,可在高糖的口腔微環(huán)境中大量繁殖,形成誘發(fā)齲齒的生物膜,最終導(dǎo)致齲齒。而共生細(xì)菌,如口腔鏈球菌,可通過產(chǎn)生大量H2O2以破壞致病菌的生物膜,維持牙齒健康。然而在高糖環(huán)境下,致病菌由于大量繁殖,代謝水平提高,會(huì)進(jìn)一步加劇有機(jī)酸的積累,致使口腔微環(huán)境對(duì)H2O2的敏感性大幅下降,致病菌生物膜難以破壞,嚴(yán)重危害牙齒健康。

因此,結(jié)合誘發(fā)齲齒的生物膜具有高糖、酸性微環(huán)境的特點(diǎn),賓夕法尼亞大學(xué)David P. CormodeHyun Koo設(shè)計(jì)并合成了一種核-殼型復(fù)合納米材料(Dex-IONP-GOx),在葡聚糖(Dex)修飾的氧化鐵納米顆粒(IONP)表面共價(jià)結(jié)合葡萄糖氧化酶(GOx)。一方面,GOx催化致齲生物膜中大量存在的葡萄糖產(chǎn)生H2O2;另一方面,具有類過氧化物酶活性的Dex-IONP在酸性條件下可催化H2O2,在局部產(chǎn)生活性氧物種(reactive oxygen speciesROS),起到有效殺菌并降解EPS基質(zhì)的作用。研究發(fā)現(xiàn), Dex-IONP-GOx能選擇性結(jié)合變異鏈球菌,相較于對(duì)共生細(xì)菌,對(duì)變異鏈球菌的殺傷作用更強(qiáng),因而能夠有效破壞致病菌的生物膜。與目前標(biāo)準(zhǔn)口服抗菌劑(洗必泰)相比,Dex-IONP-GOx能更有效地減少齲齒的發(fā)展,且不會(huì)對(duì)周圍軟組織和胃腸道微生物產(chǎn)生有害影響。


圖文導(dǎo)讀




1. Dex-IONP-GOx靶向致病性口腔生物膜的示意圖。(aDex-IONP-GOx的制備流程示意圖;(bDex-IONP-GOx對(duì)于酸性致病生物膜的選擇性催化-治療機(jī)制示意圖。


2. Dex-IONP-GOx的催化活性和抗生物膜效果。(a, bDex-IONPDex-IONP-GOx的透射電子顯微鏡圖像(TEM);(cDex-IONPGOxDex-IONP-GOx的紫外-可見光譜圖;(d)不同pH值下、有無葡萄糖時(shí)Dex-IONP-GOx催化生成ROS的情況;(eDex-IONP-GOx中鐵的相對(duì)含量及其在pH 4.5時(shí)釋放的鐵含量;(fDex-IONP-GOx及其在pH 4.5時(shí)釋放的鐵離子的催化活性;(g,h)對(duì)照組以及Dex-IONPGOxDex-IONP-GOx的抗菌活性(g)以及將其與生物膜共孵育后的生物膜干重(h);(i)對(duì)照組與Dex-IONP-GOx處理后的生物膜熒光原位雜交(FISH)顯微鏡圖像,變異鏈球菌由STR405-Cy5染色(綠色),口腔鏈球菌由MIT588-Cy3染色(黃色);(j,k)在加入不同濃度的L-抗壞血酸后,Dex-IONP-GOx的抗菌活性及將其與生物膜共孵育后的生物膜干重。

3. Dex-IONP-GOx的殺菌機(jī)制。(aDex-IONP-GOx優(yōu)先與變異鏈球菌結(jié)合并殺傷變異鏈球菌的示意圖;(b,cDex-IONPDex-IONP-GOx與變異鏈球菌或口腔鏈球菌的結(jié)合;(d)辣根過氧化酶(horseradish peroxidaseHRP)與變異鏈球菌或口腔鏈球菌的結(jié)合;(e)在加入H2O2后,HRP對(duì)細(xì)菌存活率的影響;(f)隨著時(shí)間的增長(zhǎng),Dex-IONP-GOx對(duì)細(xì)菌存活率的影響;(gDex-IONP-GOx與細(xì)菌共培養(yǎng)不同時(shí)長(zhǎng)后的細(xì)菌成像,活細(xì)胞由SYTO 60染色(綠色),死細(xì)胞由碘化丙啶染色(紅色);(h)細(xì)菌經(jīng)Dex-IONP-GOx處理后的ROS檢測(cè),ROSHPF染色(亮藍(lán)色)。

4. Dex-IONP-GOx對(duì)于生物膜相關(guān)的口腔疾病的體內(nèi)治療效果。(a-c)根據(jù)齲損嚴(yán)重程度,采用Larson修正Keyes評(píng)分系統(tǒng)基于牙齒表面記錄齲損評(píng)分;(d)所有樣本中發(fā)現(xiàn)的主要細(xì)菌屬的熱圖分析;(e)主要細(xì)菌屬的豐富度和多樣性分析;(f)加權(quán)Unifrac主坐標(biāo)分析(PCoA);(gDex-IONP-GOx中預(yù)測(cè)通路的脊圖分析;(hDex-IONP-GOx參與的糖代謝相關(guān)的通路分析。


總結(jié)與展望


本工作利用口腔齲齒相關(guān)生物膜的微環(huán)境特點(diǎn),合成了一種具有雙酶活性的復(fù)合納米材料。其中,葡萄糖氧化酶可催化葡萄糖產(chǎn)生H2O2,而具有類過氧化物酶活性的氧化鐵納米顆粒在酸性條件下催化H2O2產(chǎn)生ROS,破壞致病菌的生物膜,起到靶向殺傷作用,有效治療齲齒,維護(hù)口腔健康。


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