Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF
| 【編號(hào)】BK-NRPB57L | 【CAS號(hào)】CAS | ||
| 【貨號(hào)】BK-NRPB57L-100 | 【規(guī)格】 | ||
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| 價(jià)格： 登錄查看 | |||
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品 名：Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF
英文名：Nickel Nitrilotriacetic acid NUPharose Fast Flow, Ni-NTA NUPharose FF
規(guī) 格：20 ml，100 ml，1L，1 ml預(yù)裝柱，5 ml預(yù)裝柱，特殊規(guī)格訂制
運(yùn) 輸：2 ~ 30℃，常壓、避光
貯 存：20%乙醇，2 ~ 25℃
保質(zhì)期：5年
相關(guān)介紹：
Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF以瓊脂糖微球?yàn)榛|(zhì)，通過活化偶聯(lián)次氮基三乙酸（NTA），再螯合Ni2+。與亞氨基二乙酸（IDA）相比，具有更好的螯合劑、還原劑、堿性的耐受性，如樣品中含有1-10mM EDTA或1-10mM β-巰基乙醇或5mM DTT，可正常純化；在螯合鎳的情況下，也可以用0.1M NaOH清洗。
Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF主要用于純化帶組氨酸標(biāo)簽（His-Tag）的重組蛋白。純化原理是利用重組蛋白組氨酸標(biāo)簽的咪唑環(huán)可與過渡金屬Ni2+形成穩(wěn)定的配位鍵，因此能特異、牢固、可逆地吸附于固定這些金屬離子的基質(zhì)，結(jié)合了His-Tag重組蛋白的Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF一般通過增加咪唑濃度進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)洗脫。
技術(shù)指標(biāo)：
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基質(zhì) |
4%瓊脂糖凝膠 |
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配基 |
-N(CH2COOH)3 |
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配基密度 |
≥15 μmol/ml |
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填料粒徑 |
60~180 μm |
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最大流速 |
800 cm/h |
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推薦流速 |
50-100 cm/h |
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pH穩(wěn)定性 |
pH 5-12，pH 3~13 |
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耐反壓 |
0.3 MPa |
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載量 |
≥20 mg His-tag重組蛋白/ml |
使用方法：
1、色譜柱裝填
（1）所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體最好做脫氣處理。
（2）在柱子下端加入蒸餾水，以除去柱子中的空氣，關(guān)閉柱子出口，在柱內(nèi)保留少量的蒸餾水。
（3）將瓊脂糖凝膠連續(xù)倒入柱子時(shí)，要用玻璃棒的緊靠柱子內(nèi)壁引流，以減少氣泡的產(chǎn)生，讓填料先自然沉降。
（4）柱壓不超過0.3MPa，如果裝柱系統(tǒng)中無法測(cè)柱壓，則正常流速下填裝。
（5）填裝好的Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF柱用2-5個(gè)柱體積的初始緩沖溶液平衡，建議流速100cm/h，平衡后的柱子可以用于His-Tag重組蛋白的上樣和洗脫純化。
2、上樣
（1）緩沖液選擇：一般選用pH6-8的結(jié)合緩沖液，常用緩沖液有10-00mM 磷酸鈉緩沖液、20-200mM Tris-HCl緩沖液等。在緩沖液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl，以消除離子交換作用。在初次使用Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF，推薦使用50mM PBS（50 mM NaH2PO4，0.5M NaCl，NaOH調(diào)節(jié)pH 7.4）作為結(jié)合緩沖液。
（2）樣品處理：樣品的緩沖液應(yīng)與所選結(jié)合緩沖液一致。為保證緩沖液一致，可以在結(jié)合緩沖液中破碎細(xì)菌、或調(diào)解pH與結(jié)合緩沖液一致、或交換至結(jié)合緩沖液（常用方法有透析、超濾、脫鹽柱換液等）、或用結(jié)合緩沖液稀釋2-10倍等。樣品上柱前應(yīng)0.45μm過濾。
3、洗脫
（1）Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF最常用的洗脫方法為增加咪唑濃度進(jìn)行洗脫。
（2）咪唑?yàn)閴A性，相應(yīng)緩沖液配制后需要用HCl進(jìn)行調(diào)節(jié)pH。
（3）在初次使用Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF，不知道洗脫的咪唑濃度，建議在結(jié)合緩沖液中分別加入10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、500mM咪唑，濃度從低到高，分別洗脫和收集，通過SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫組份。
（4）有條件的也可以進(jìn)行線性咪唑梯度洗脫，確定較佳洗脫條件。
4、在位清洗
在多次使用后需要在位清洗，常用方法為先5個(gè)柱體積蒸餾水清洗，再用1-3個(gè)柱體積50mM NaOH清洗10-20min，立即用5個(gè)柱體積結(jié)合緩沖液（50mM PBS）清洗平衡。
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