重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF中壓預裝柱
| 【編號】BK-NRPB52S | 【CAS號】CAS | ||
| 【貨號】BK-NRPB52S-Y25 | 【規格】 | ||
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| 價格： 登錄查看 | |||
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品 名：重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF
英文名：Recombinant Protein L NUPharose Fast Flow, rProtein L NUPharose FF
規 格：20 ml，100 ml，1L，1 ml預裝柱，5 ml預裝柱，特殊規格訂制
運 輸：2 ~ 25℃，常壓、避光
貯 存：20%乙醇，2-8℃
保質期：3年
相關介紹：
重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF是將重組大消化鏈球菌蛋白L（Recombinant Peptostreptococcus magnus Protein L，簡稱r-PPL）偶聯在高度交聯的瓊脂糖凝膠上的一種親和純化介質。大消化鏈球菌蛋白L（PPL）能與抗體的κ輕鏈結合而不會影響抗體的抗原結合位點，這一特性使其與結合抗體Fc區域的蛋白A、蛋白G相比，能更廣泛地結合各種來源及亞類的抗體。如人類的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD，以及含κ輕鏈（人類1、3、4型，小鼠1型）的Fab、scFv等抗體片段。但不能與重鏈、λ輕鏈、κ輕鏈（2型）結合，所以重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF不能純化牛、山羊、綿羊、雞來源的抗體。
技術指標：
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基質 |
4%高度交聯瓊脂糖凝膠 |
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配基 |
重組蛋白L |
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配基密度 |
≥6 mg/ml |
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填料粒徑 |
60~180 μm |
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最大流速 |
800 cm/h |
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推薦流速 |
20-100 cm/h |
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工作（清洗）pH值 |
2~9(2~10) |
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耐反壓 |
0.3 MPa |
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載量 |
≥40 mg/ml human IgG |
抗體與蛋白A、蛋白G的結合力：
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種類 Species |
亞型 Antibody Class |
蛋白A Protein A |
蛋白G Protein G |
蛋白L Protein L |
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人 Human |
IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab |
+++ +++ + +++ + - + + |
+++ +++ +++ +++ - - - + |
+++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ |
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小鼠 Mouse |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM |
+ +++ +++ +++ - |
++ +++ +++ +++ - |
+++ +++ +++ +++ +++ |
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大鼠 Rat |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c |
+ - - +++ |
++ +++ + +++ |
+++ +++ +++ +++ |
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牛 Cow |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
- - |
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山羊 Goat |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
- - |
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馬 Horse |
IgG(ab) IgG(c) IgG(T) |
+ + - |
- - +++ |
NA NA NA |
|
兔Rabbit |
IgG |
+++ |
+++ |
+ |
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豬Pig |
IgG |
+++ |
+ |
+++ |
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狗Dog |
IgG |
+++ |
+ |
NA |
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雞Chicken |
IgY |
- |
- |
- |
注：-表示不結合；+表示微弱結合；++表示中等結合；+++表示很強結合；NA表示暫無數據。能用于親和純化的抗體一般需要中等以上的結合力。
應用舉例：
結合緩沖液：20 mM磷酸鹽緩沖液（PB），pH 7.4
洗脫緩沖液：0.1 M檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，pH 2.7
中和緩沖液：1 M Tris-HCl，pH 9.0
1)1 ml重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF預裝柱，用5~10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液；
2)用結合緩沖液平衡 5~10個柱床體積；
3)將3 ml小鼠腹水用結合緩沖液稀釋至15 ml，0.45 μm濾膜過濾上樣；
4)用結合緩沖液平衡 5~10個柱床體積至基線；
5)用洗脫緩沖液洗脫抗體，收集洗脫峰，并用中和緩沖液調節其pH至中性；
6)每次使用后再用3~5個柱床體積的洗脫緩沖液再生清洗；
7)SDS-PAGE（圖1）電泳分析洗脫下來的小鼠單抗純度在95%以上。
注意事項：
1)預填柱使用簡易方便，在沒有儀器設備的條件下也可以完成純化任務。
2)樣品洗脫后一般pH很低，應立即用堿性中和緩沖液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 將收集到的抗體溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5%~20%、pH 7-9的緩沖液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩沖液），以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。
3)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內產生氣泡，影響純化效果，如果已經產生氣泡，可以自行重裝柱子。
4)通常目標樣品洗脫后應繼續用0.1 M檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH 2.0~2.7）洗3~5個柱體積，然后用平衡緩沖液清洗5個柱體積以上，作簡易再生。
5)使用數次后應進行在位清洗，建議用0.1% Triton X-100 37℃洗1-3個柱體積（10~30min），立即用平衡緩沖液清洗5個柱體積以上；或70%乙醇洗5個柱體積以上（可保持4~16h），再用平衡緩沖液清洗5柱體積以上；或10mM NaOH洗1-3個柱體積（10-20min），再用平衡緩沖液清洗5柱體積以上。在位清洗能去除強疏水性蛋白質和脂類，恢復柱子的載量和流速。
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