肝素-瓊脂糖凝膠FF重力預(yù)裝柱
| 【編號(hào)】BK-NRPB09S | 【CAS號(hào)】CAS | ||
| 【貨號(hào)】BK-NRPB09S-Z25 | 【規(guī)格】 | ||
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| 價(jià)格： 登錄查看 | |||
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品 名：肝素-瓊脂糖凝膠FF
英文名：Heparin NUPharose Fast Flow, Heparin NUPharose FF
規(guī) 格：20 ml，100 ml，1 L，1 ml預(yù)裝柱，5 ml預(yù)裝柱，特殊規(guī)格訂制
運(yùn) 輸：2 ~ 25℃，常壓、避光
貯 存：0.05M NaAc的20%乙醇，2 ~ 8℃
保質(zhì)期：3年
相關(guān)介紹：
肝素-瓊脂糖凝膠FF是一種將肝素鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質(zhì)。該產(chǎn)品保留了瓊脂糖極好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，與生物活性大分子有很好的相容性，具有載量高，非特異性吸附少，流速快等特點(diǎn)，主要用于凝血酶III、凝血因子、脂蛋白、酯酶、激素、干擾素等的分離純化。
技術(shù)指標(biāo)：
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基質(zhì) |
6%交聯(lián)瓊脂糖 |
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配體 |
肝素 |
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配體密度 |
5 mg/mL |
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蛋白質(zhì)載量 |
約2 mg抗凝血酶Ⅲ /mL |
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最大流速 |
800 cm/h |
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推薦流速 |
20 ~ 100 cm/h |
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耐反壓 |
0.3 MPa |
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粒徑范圍 |
60 ~ 180 μm |
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工作溫度 |
4 ~ 40℃ |
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pH穩(wěn)定性 |
4 ~ 12（長(zhǎng)時(shí)間）；3 ~ 14（短時(shí)間） |
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耐熱 |
pH 7水中，120℃滅菌30 min |
使用方法：
1. 裝柱
1.1 根據(jù)分離目標(biāo)性質(zhì)配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。
1.2 將凝膠抽干，并用蒸餾水洗滌2次去除保存的乙醇，用蒸餾水配成勻漿并脫氣。
1.3 將層析柱垂直固定，底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一段液位。
1.4 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降。
1.5 連結(jié)好柱子頂端活動(dòng)柱頭，打開蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)操作流速流過5柱體積，再使用1.5倍的操作流速流過5柱體積，調(diào)節(jié)適配柱頭，使其盡量貼近膠面，最后用2 ~ 3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
注意：
1)所有操作過程不能引入氣泡，保證裝膠的均勻度。
2)如無(wú)條件做1.2，填料層有氣泡，可進(jìn)行2次裝柱，去除保存的乙醇和氣泡。
3)乙醇等試劑配制的溶液需要脫氣。
2. 平衡
將平衡緩沖液以操作流速平衡層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到UV、pH、電導(dǎo)等參數(shù)不變。推薦的平衡緩沖液為：50 mM Tris-HCl，pH 8.0。
3. 上樣
切換轉(zhuǎn)換閥進(jìn)行上樣，上樣量根據(jù)樣品的性質(zhì)和層析介質(zhì)的量進(jìn)行選擇，也可進(jìn)行線性實(shí)驗(yàn)找到最佳上樣量；樣品的預(yù)處理：置換緩沖液，澄清過濾（0.45、0.22 μm）等。
4. 沖洗
用2 ~ 3個(gè)柱體積的平衡緩沖液沖洗上樣后的層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到UV、pH、電導(dǎo)等參數(shù)不變。
5. 洗脫
一般推薦用高鹽溶液（可含緩沖成分）進(jìn)行洗脫，為獲得較好的純度，可以分梯度進(jìn)行洗脫。推薦的洗脫緩沖液為：50 mM Tris-HCl，2 M NaCl，pH 8.0。
6. 再生
用蒸餾水按操作流速?zèng)_洗3 ~ 5個(gè)柱體積，接著用平衡液洗到平衡3 ~ 5個(gè)柱體積。
若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
7. 在位清洗(CIP)
對(duì)于強(qiáng)結(jié)合蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)，可采用以下流程進(jìn)行在位清洗：0.1 mol/L NaOH洗2個(gè)柱體積，8 mol/L尿素洗2個(gè)柱體積，平衡緩沖液洗2個(gè)柱體積。
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