Oligo(dT)磁珠是一款用于雜交提取mRNA超順磁單分散的磁珠,其表面共價(jià)偶聯(lián)了寡聚dT序列,利用磁珠表面的寡聚dT序列可以和mRNA的polyA尾之間的堿基配對(duì),可以從真核總RNA或者細(xì)胞、動(dòng)植物組織中快速分離高純度完整mRNA。所分離的mRNA可以直接用于分子生物學(xué)中的大多數(shù)下游應(yīng)用:RT-PCR、固相cDNA文庫構(gòu)建、S1核酸酶分析、核糖核酸酶保護(hù)分析、引物延伸、點(diǎn)雜交和槽雜交、體外擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)、RACE、消減雜交。Northern分析、基因克隆和基因表達(dá)分析。由于低聚物dT與磁珠表面共價(jià)結(jié)合特性,因此Bio Mag Beads oligo(DT)可以重復(fù)使用(原則上不建議回收反復(fù)利用,以避免交叉污染和影響下游實(shí)驗(yàn))。
二、產(chǎn)品描述:
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配體
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Oligo(dT)
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磁珠表層材料
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超順磁親水高分子磁珠
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包裝
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2ml、10ml
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粒徑大小
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1μm
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濃度
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5mg/ml
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結(jié)合量
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≈5μg的mRNA/10mg磁珠
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建議pH使用范圍
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1-9
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沉降系數(shù)
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2mg/ml磁珠在60ul以下體積沉降時(shí)間應(yīng)該不大于10s
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磁珠保存液
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10mM PBS, 0.09%sodium azide,pH=7.4。
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保存
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4℃,禁止冷凍,使用前請(qǐng)充分混勻
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批號(hào)
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Lot:
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保存期
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2-8℃保存,保質(zhì)期三年,請(qǐng)于 年 月 日前使用。
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注意事項(xiàng)
1.所有buffer在使用前要預(yù)冷到2-8℃。
2.要保證磁珠分散在溶液中,嚴(yán)禁磁珠干燥,會(huì)影響磁珠的分散和結(jié)合能力。
3.磁吸附后移除上清的步驟,必須完全移除掉所有上清。
4.我們建議提取到的mRNA立即用于RT-PCR。如果需要保存,建議洗脫液中添加RNase抑制劑,將mRNA從磁珠上洗脫下來并且凍存
5.避免污染,在操作過程中請(qǐng)佩戴一次性手套,避免接觸其他污染物,并且建議多次更換手套,所有用于mRNA提取的buffer和耗材都應(yīng)該是無核糖核酸酶的。
三、緩沖液配制
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Binding Buffer
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20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 1.0 M LiCl, 2 mM EDTA.
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Lysis/Binding Buffer
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100 mM Tris-HCl, pH 7.5, 500 mM LiCl, 10 mM EDTA, 1% LiDS, 5 mM dithiothreitol (DTT),如果發(fā)現(xiàn)沉淀,加熱并且搖動(dòng)溶解至澄清。
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Washing Buffer A
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10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 0.15 M LiCl, 1 mM EDTA, 0.1% LiDS.
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Washing Buffer B
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10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 0.15 M LiCl, 1 mM EDTA 10 mM Tris-HCl, pH 7.5.
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注:如果提取后的mRNA不馬上使用,請(qǐng)?jiān)谙疵撘褐刑砑覴Nase抑制劑,冷凍保存。
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