本說明書僅作參考,用戶可根據實際情況進行適當調整。
產品組分
組分:多孔 GelMA
質量:0.6gX2
儲存及運輸
干態:-20℃避光.6個月,可常溫運輸。溶液:4℃避光,7天;-20℃避光.3個月;溶液反復凍融會影響產品性能,盡量現配現用。
有效日期
生產日期見包裝。
所需材料GM-PR系列多孔 GelMA水凝膠產品
PBS(1X)
恒溫磁力攪拌水浴鍋
0.22 um無菌針頭過濾器
10-50 mL無菌離心管
10 mL注射器
1-5 mL移液槍及槍頭
LS-1601 系列405nm化平源
操作步驟
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步驟
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名稱
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材料
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過程
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1
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溶液配制
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GM-PR系列多孔 GellMA 1)向多孔 GelM
PBS (1X)
移液槍
恒溫水浴磁力攪拌器
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1)向多孔 GelMA包裝瓶中加入10 mL PBS;(瓶內含磁力轉子、0.6g多孔 GelMA產品)
2)37℃避光水浴磁力攪拌1h(重要步驟〕制備多孔 GelMA水凝膠前驅體溶液。
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2
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溶液除菌
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0.22 um無菌針頭過濾器
恒溫水浴鍋
無菌離心管
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1將上述溶液立即使用0.22 um無菌針頭過濾器除菌(防止降溫凝膠化).37℃避光保溫備用。注:如無法一次用完可于冰箱冷藏短期保存(<7 day)。下次使用前于37℃復溶.并振蕩20-30s使材料均勻。
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3
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混合細胞
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1收集細胞;
2用無菌前驅體溶液重懸細胞〔多次吹打或振蕩}。
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4
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凝膠固化
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移液槍及槍頭
LS-1601系列固化光源
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1將前驅體溶液加入孔板;96孔板:50~100 uL/孔,48孔板:100~300uL孔,24孔板:300-500 uL/孔
2室溫靜置2min;
3以LS-1601系列405nm光源貼近孔板輻照10-20以固化水凝膠。
注:GM-PR-001輻照時間~175s GM-PR-002輻照時間~15s
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5
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清洗樣品
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移液槍及槍頭
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1)加入培養基,置于37度培養箱中5分鐘
2)吸去培養基
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6
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細胞培養
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根據實驗設計進行培養基更換、觀察拍照等操作
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操作步驟(2D細胞培養)
多孔 GelMA水凝膠2D細胞培養操作步驟與3D培養主要步驟一致,只是省去了步驟3混合細胞。步驟6清洗樣品完成后即可進行細胞表面種植。
溫馨提示:請勿直視固化光源
雖然水凝膠內部也自帶孔隙結構,但其孔隙過小,使得包裹細胞進行三維培養及生物3D打印時內部的養物質傳輸及細胞代謝廢物排出不暢,致密的孔隙阻礙了細胞更好的功能化。為了提高水凝膠內細胞與外界的物質交換效率,并為細胞生長增殖提供更多空間,團隊持續攻關,成功研制出了高孔隙率GelMA水凝膠
獲得數十乃至數百微米孔隙結構,常規做法是通過乳液造孔獲得,這些工藝存在穩定性差、操作復雜等缺點。BKNM-GM-PR系列通過材料學顛覆性的設計,其使用體驗與常規GelMA材料無任何區別,只需要溶解、光照固化即可輕松獲得數百微米孔隙結構水凝膠(圖1)。
圖1 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝膠操作流程
01 微觀形貌
BKNM-GM-PR系列具有幾微米至幾百微米的孔道結構以適應不同應用需求。通常三維細胞培養時需要50微米以上的孔隙結構,大的孔隙結構可為細胞提供高效的物質交換通道,也為細胞增殖、生長提供空間,能顯著提高細胞的增殖活性。(圖2)
圖2 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝膠可控微觀孔道結構的激光共聚焦照片
02 細胞培養
BKNM-GM-PR系列多孔水凝膠在細胞培養方面具有優異的性能,通過與GelMA無孔水凝膠對比可以明顯看出多孔GelMA水凝膠的優勢。兩種配方的多孔GelMA水凝膠其內部細胞增殖速率均高于GelMA無孔水凝膠,在培養第7天時出現了數倍的細胞數量差。(圖3)
圖3 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝膠內部細胞增殖熒光照片及定量分析
在凝膠表面進行細胞培養時,多孔GelMA同樣具有優秀表現,貫通的孔道結構使接種在表面的細胞呈現向凝膠內部遷移的趨勢,第9天細胞遷移深度可達約540μm。(圖4)
圖4BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝膠表面細胞培養熒光照片(紅色為熒光GelMA)
03 水凝膠培養過程穩定性
多孔結構水凝膠其比表面積遠大于普通無孔水凝膠,因此,多孔水凝膠在相同基體凝膠強度條件通常比無孔水凝膠降解更快。為了支持長時間的細胞培養,EFL團隊通過優化配方,在實現優異細胞增殖性能的同時賦予多孔水凝膠良好的穩定性。通過與普通GelMA無孔水凝膠對比,BKNM-GM-PR系列多孔水凝膠在細胞增殖及凝膠穩定性方面均有更好的表現。(圖5)
圖5 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝膠培養過程穩定性測試數碼照片及細胞熒光照片
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