水凝膠：多孔GelMA
| 【編號】BK2020121707 | 【CAS號】cas | ||
| 【貨號】BK2020121707-02 | 【規(guī)格】 | ||
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| 價(jià)格： 登錄查看 | |||
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本說明書僅作參考，用戶可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。
產(chǎn)品組分
組分：多孔 GelMA
質(zhì)量：0.6gX2
儲存及運(yùn)輸
干態(tài):-20℃避光.6個月,可常溫運(yùn)輸。溶液:4℃避光,7天;-20℃避光.3個月;溶液反復(fù)凍融會影響產(chǎn)品性能,盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
有效日期
生產(chǎn)日期見包裝。
所需材料GM-PR系列多孔 GelMA水凝膠產(chǎn)品
PBS（1X)
恒溫磁力攪拌水浴鍋0.22 um無菌針頭過濾器
10-50 mL無菌離心管
10 mL注射器
1-5 mL移液槍及槍頭
LS-1601 系列405nm化平源
操作步驟
| 步驟 | 名稱 | 材料 |
過程 |
| 1 | 溶液配制 |
GM-PR系列多孔 GellMA 1)向多孔 GelM PBS (1X) 移液槍 恒溫水浴磁力攪拌器 |
1)向多孔 GelMA包裝瓶中加入10 mL PBS;(瓶內(nèi)含磁力轉(zhuǎn)子、0.6g多孔 GelMA產(chǎn)品) 2）37℃避光水浴磁力攪拌1h(重要步驟〕制備多孔 GelMA水凝膠前驅(qū)體溶液。 |
| 2 | 溶液除菌 |
0.22 um無菌針頭過濾器 恒溫水浴鍋 無菌離心管 |
1將上述溶液立即使用0.22 um無菌針頭過濾器除菌(防止降溫凝膠化)．37℃避光保溫備用。注:如無法一次用完可于冰箱冷藏短期保存(<7 day)。下次使用前于37℃復(fù)溶.并振蕩20-30s使材料均勻。 |
| 3 | 混合細(xì)胞 |
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1收集細(xì)胞; 2用無菌前驅(qū)體溶液重懸細(xì)胞〔多次吹打或振蕩}。
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| 4 | 凝膠固化 |
移液槍及槍頭 LS-1601系列固化光源 |
1將前驅(qū)體溶液加入孔板;96孔板:50~100 uL/孔，48孔板:100~300uL孔，24孔板:300-500 uL/孔 2室溫靜置2min; 3以LS-1601系列405nm光源貼近孔板輻照10-20以固化水凝膠。 注:GM-PR-001輻照時(shí)間~175s GM-PR-002輻照時(shí)間~15s |
| 5 | 清洗樣品 | 移液槍及槍頭 |
1）加入培養(yǎng)基，置于37度培養(yǎng)箱中5分鐘 2）吸去培養(yǎng)基 |
| 6 | 細(xì)胞培養(yǎng) |
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根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行培養(yǎng)基更換、觀察拍照等操作 |
操作步驟（2D細(xì)胞培養(yǎng)）
多孔 GelMA水凝膠2D細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟與3D培養(yǎng)主要步驟一致，只是省去了步驟3混合細(xì)胞。步驟6清洗樣品完成后即可進(jìn)行細(xì)胞表面種植。
溫馨提示：請勿直視固化光源
雖然水凝膠內(nèi)部也自帶孔隙結(jié)構(gòu)，但其孔隙過小，使得包裹細(xì)胞進(jìn)行三維培養(yǎng)及生物3D打印時(shí)內(nèi)部的養(yǎng)物質(zhì)傳輸及細(xì)胞代謝廢物排出不暢，致密的孔隙阻礙了細(xì)胞更好的功能化。為了提高水凝膠內(nèi)細(xì)胞與外界的物質(zhì)交換效率，并為細(xì)胞生長增殖提供更多空間，團(tuán)隊(duì)持續(xù)攻關(guān)，成功研制出了高孔隙率GelMA水凝膠
獲得數(shù)十乃至數(shù)百微米孔隙結(jié)構(gòu)，常規(guī)做法是通過乳液造孔獲得，這些工藝存在穩(wěn)定性差、操作復(fù)雜等缺點(diǎn)。BKNM-GM-PR系列通過材料學(xué)顛覆性的設(shè)計(jì)，其使用體驗(yàn)與常規(guī)GelMA材料無任何區(qū)別，只需要溶解、光照固化即可輕松獲得數(shù)百微米孔隙結(jié)構(gòu)水凝膠（圖1）。
圖1 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝膠操作流程
01 微觀形貌
BKNM-GM-PR系列具有幾微米至幾百微米的孔道結(jié)構(gòu)以適應(yīng)不同應(yīng)用需求。通常三維細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要50微米以上的孔隙結(jié)構(gòu)，大的孔隙結(jié)構(gòu)可為細(xì)胞提供高效的物質(zhì)交換通道，也為細(xì)胞增殖、生長提供空間，能顯著提高細(xì)胞的增殖活性。（圖2）
圖2 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝膠可控微觀孔道結(jié)構(gòu)的激光共聚焦照片
02 細(xì)胞培養(yǎng)
BKNM-GM-PR系列多孔水凝膠在細(xì)胞培養(yǎng)方面具有優(yōu)異的性能，通過與GelMA無孔水凝膠對比可以明顯看出多孔GelMA水凝膠的優(yōu)勢。兩種配方的多孔GelMA水凝膠其內(nèi)部細(xì)胞增殖速率均高于GelMA無孔水凝膠，在培養(yǎng)第7天時(shí)出現(xiàn)了數(shù)倍的細(xì)胞數(shù)量差。（圖3）
圖3 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝膠內(nèi)部細(xì)胞增殖熒光照片及定量分析
在凝膠表面進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，多孔GelMA同樣具有優(yōu)秀表現(xiàn)，貫通的孔道結(jié)構(gòu)使接種在表面的細(xì)胞呈現(xiàn)向凝膠內(nèi)部遷移的趨勢，第9天細(xì)胞遷移深度可達(dá)約540μm。（圖4）
圖4BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝膠表面細(xì)胞培養(yǎng)熒光照片（紅色為熒光GelMA）
03 水凝膠培養(yǎng)過程穩(wěn)定性
多孔結(jié)構(gòu)水凝膠其比表面積遠(yuǎn)大于普通無孔水凝膠，因此，多孔水凝膠在相同基體凝膠強(qiáng)度條件通常比無孔水凝膠降解更快。為了支持長時(shí)間的細(xì)胞培養(yǎng)，EFL團(tuán)隊(duì)通過優(yōu)化配方，在實(shí)現(xiàn)優(yōu)異細(xì)胞增殖性能的同時(shí)賦予多孔水凝膠良好的穩(wěn)定性。通過與普通GelMA無孔水凝膠對比，BKNM-GM-PR系列多孔水凝膠在細(xì)胞增殖及凝膠穩(wěn)定性方面均有更好的表現(xiàn)。（圖5）
圖5 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝膠培養(yǎng)過程穩(wěn)定性測試數(shù)碼照片及細(xì)胞熒光照片
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